摘要:
目的建立基于发根培养的三分三Anisodus acutangulus遗传转化体系及在三分三发根中表达外源基因的方法。方法由种子直接萌发得到无菌苗，建立了三分三的无菌苗培养系统。将植物高效表达载体pCAMBIA1304^＋导入经过“disarmed”改造的根癌农杆菌C58C1（携带pRiA4质粒），获得了携带外源基因表达载体的重组C58C1工程菌。取生长良好的幼嫩真叶作为外植体，在乙酰丁香酮的诱导下用重组C58C1进行感染，诱导发根。选取在无激素培养基上生长迅速，分支多的发根单克隆进行继代培养。经过3次继代培养，PCR（polymerase chain reaction，聚合酶链式反应）检测用于验证发根型质粒pRiA4和表达型质粒pCAMBIA1304^＋是否整合到三分三发根基因组内。结果建立了基于发根培养的三分三遗传转化体系，发根诱导频率达到100％，PCR检测表明pRiA4和pCAMBIA1304^＋质粒共转化率达到32％。结论该方法可以用于在三分三发根中高效表达外源基因，为实现基于发根的三分三产托品烷类生物碱的代谢工程奠定了基础。
