摘要:
目的建立改良分子信标-双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验. 方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(TDH)的保守序列,分别设计引物和改良分子信标探针,以10种细菌作对照,建立双重实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测. 结果改良分子信标-双重实时PCR反应体系DNA灵敏度为102.4～166.6fg/μl,菌液灵敏度为32～64CFU/ml或3～6CFU/PCR反应体系,无交叉反应.此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰.对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测,9份副溶血弧菌实时PCR阳性,其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性,其余样品都为阴性.从样品处理到检测结果仅需1天时间. 结论改良分子信标-双重实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.
