【正清学术】抗关节炎中药单体化合物青藤碱对淋巴细胞增殖的抑制作用研究

很多细胞的活化都跟类风湿关节炎（RA）发生过程密切相关,包括淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、滑骨细胞和软骨细胞等。此外，有一个公认的假说认为RA可能代表着一种慢性免疫介导的疾病，它的发生和发展都是依赖T淋巴细胞对未知抗原的反应，因此，为了更深入研究青藤碱相关药理机制，研究员就做了青藤碱对淋巴细胞活性的影响实验，结果发现青藤碱对淋巴细胞的增殖具有抑制作用。

从DBA/2和C57/BL6小鼠脾脏中提取小鼠脾细胞， 然后用RPMI1640培养基洗3遍（1400rpm,10min）后培养；从健康成人静脉抽取的血液，肝素化后，采用聚蔗糖 - 泛影葡胺（Ficoll-Hypaque）密度梯度离心（全血：聚蔗糖=1.5:1，1800rpm，20min），然后用RPMI1640培养基洗2遍（1600rpm,10min），分离PBMC细胞后培养。本实验采用的促进淋巴细胞增殖的方法有：1.利用多种促细胞分裂剂（PHA：植物血球凝集素、ConA：促细胞有丝分裂刀豆素A、TPA：十四烷酰佛波醇乙酸酯、Ionomycin：Ca2+的转运剂）诱导人外周血单核细胞（PBMC）和小鼠脾细胞的增殖；2.利用双向混合淋巴细胞培养（MLC）的培养方式促进淋巴细胞的增殖。青藤碱在细胞培养前以特定的浓度加入细胞中共培养，利用[3H]-胸腺嘧啶核苷掺入法，检测体外淋巴细胞转化情况。

1、青藤碱对小鼠脾细胞增殖的抑制：无论是由ConA等促细胞分裂剂诱导的淋巴细胞增殖，还是由双向混合淋巴细胞培养(MLC)的方式促进淋巴细胞的增殖都受青藤碱的药物抑制作用，而MLC组对药物的抑制作用更为敏感，都获得比较明显的抑制曲线。Con A组 ( 2天的潜伏期，半数抑制浓度：400 mM) ， MLC组 (5天的潜伏期，半数抑制浓度：60 mM) 。

2、以类似的实验方法刺激PBMC的增殖，其中淋巴细胞也能被青藤碱有效的抑制。PHA组 (5天的潜伏期，半数抑制浓度：34mM) ；TPA+ionomycine 组(5天的潜伏期，半数抑制浓度：129 mM) ；MLC (5天的潜伏期，半数抑制浓度：100 mM) 。

本项研究是由澳门科技大学校长——刘良教授领导的研究团队共同完成的，刘良教授一直致力于正清风痛宁系列产品主要成分盐酸青藤碱的药理研究，由他主持的“正清风痛宁研究项目”荣获2012年国家科技进步奖二等奖。

内容摘自"Liu L., Resch K., Kaever V.*(1994)Inhibition of lymphocyte proliferation by the anti-arthritic drug sinomenine.International journal of immunopharmacology.16（8）:685-91.[In English]"