摘要:
目的：探讨跳骨片含药血清抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制。方法：将10只8周龄雄性SD大鼠随机分为跳骨片组和空白组,跳骨片组以0.32 g·kg-1剂量的跳骨片灌胃,空白组给予等量生理盐水灌胃;每天灌胃1次,连续7 d;末次灌胃1 h后,经腹主动脉取血,分别制备跳骨片含药血清和空白血清,低温保存备用。从10只4周龄SD大鼠膝关节软骨中分离软骨细胞并培养,光学显微镜下观察软骨细胞形态,并用Ⅱ型胶原酶免疫组化鉴定。将培养好的第2代软骨细胞随机分为空白血清组、模型组、跳骨片含药血清组,其中空白血清组以含10%空白血清的培养基（dulbecco modified eagle medium,DMEM）培养;模型组以浓度为10 ng·mL-1的脂多糖和含10%空白血清的DMEM培养;跳骨片含药血清组以浓度为10 ng·mL-1的脂多糖和含10%跳骨片含药血清的DMEM培养;3组均连续干预培养8 h,采用酶联免疫吸附法检测软骨细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）3、MMP9含量,采用荧光定量RT-PCR法检测软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达水平,采用Western blot法检测软骨细胞中β-链蛋白（β-catenin）、卷曲蛋白-2（Frizzled-2）的蛋白表达量,采用免疫荧光检测法检测软骨细胞中β-catenin、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthasc kinase-3β,GSK-3β）、蛋白多糖1（proteoglycans 1,PGS1）的蛋白表达量。结果：（1）软骨细胞免疫组化鉴定结果。第2代软骨细胞胞浆及细胞膜呈棕黄色阳性染色,具有典型的软骨细胞生物学特征。（2）软骨细胞MMP3、MMP9含量。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组的软骨细胞MMP3、MMP9含量比较,组间差异均有统计学意义[（34.019±1.036）ng·mL-1,（44.645±2.473）ng·mL-1,（32.941±1.792）ng·mL-1,F=36.060,P=0.000;（1.348±0.038）ng·mL-1,（1.562±0.112）ng·mL-1,（1.331±0.015）ng·mL-1,F=11.319,P=0.0
