动物模型研究∣斑秃动物模型制备规范(草案)

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文献来源(内容选摘):中华中医药学会中药实验药理专业委员会. 斑秃动物模型制备规范(草案). 中药新药与临床药理,2018,29(1):42-46.


    斑秃AA)是一种突发瘢痕性脱发疾病,也是一种慢性炎症性皮肤疾病,在世界范围内发病率为0.1%0.2%。其特点是:圆形或卵圆形脱发斑,脱发区皮肤变薄,感觉正常,无自觉症状,可发生于任何年龄,男女均可发病,头皮为最常见发病部位,发病后5%10%的病例可迅速发展,在数天或数月内头发全部脱落而成全秃(AT),少数严重患者眉毛、胡须、腋毛、阴毛都可脱落而成普秃(AU)。现斑秃模型为病理性模型,以西医指标为主。基于对斑秃中西医临床病症特点分析及对现有动物模型大量实验研究,形成如下斑秃动物模型制备规范(草案)。

1 造模动物

      用于制备斑秃模型的动物主要是小鼠,C3H/HeJ 小鼠和C57BL/6 小鼠。一般选成年小鼠,雌雄各半或单一性别。

2 造模方法‍

2.1咪喹莫特乳膏诱发制备C3H/HeJ小鼠斑秃模型

2.1.1原理  咪喹莫特干扰素诱导剂与细胞表面的Toll样受体7(Toll-like receptors7TLR7)结合后可使小鼠脱毛,制备斑秃模型。

2.1.2方法  选取68 周龄SPF 健康雄性 C3H/He J 小鼠,外观毛发完好无损。适应性饲养1周后,项部涂咪喹莫特乳膏,每周3每次小心取出小鼠,用清洁医用棉签酌取咪喹莫特膏体约 0.05g,均匀涂至项部皮肤,涂抹范围1.5cm×1.5cm。每周3次。每次药前均用生理盐水清洁局部,以去除前次残留药物。给药3060d,给药部位>1cm×1cm大小斑秃面积,制备模型成功本模型可维持1739d

2.2环磷酰胺诱发制备C57BL/6小鼠斑秃模型

2.2.1原理  抗肿瘤药物环磷酰胺引起毛发脱落是常见的生长期秃发,这些药物在消灭迅速分裂的癌细胞同时,也攻击毛囊四周迅速分裂的细胞,制备斑秃模型。

2.2.2方法  选取68 周龄SPF ,雌性,C57BL/6 小鼠,将小鼠用乙醚轻度麻醉后,将按11比例混合的松香和石蜡加热融化后涂于背部,凝固变硬后揭去,诱导生长期毛发范围约为3cm×4cm。于拔毛后第89天,小鼠背部皮肤诱导生长期毛囊产生,单剂量腹腔注射环磷酰胺 150 mg·kg-1,注射环磷酰胺 45d,小鼠头部和背部毛发开始出现脱落,成功诱导严重的毛发脱落,制备出生长期秃发动物模型。本模型可维持20d左右。

2.3干扰素-γ(IFN-γ)诱发制备C3H/HeJ 小鼠斑秃模型

2.3.1原理  IFN-γ上调毛周细胞表面主要组织相容性复合物(MHC-I的表达,从而使原来受免疫赦免状态保护的生长期毛囊失免疫赦免,毛囊受攻击而发生斑秃制备斑秃模型。

2.3.2方法  选取C3H/HeJ小鼠,雄性,SPF级。用脱毛术(同2.2项)使所有小鼠毛囊生长周期进入生长期达到同步化的目的。进入实验的小鼠,每天尾静脉注射干扰素-γ 2×104U·mL-1的稀释液0.1mL连续注射3d休息7d然后重复上述操作2个月IFN-γ注射,加速了有斑秃易感基因鼠种( C3H/HeJ )小鼠器官特异性疾病斑秃的发展。实验第3天出现块状脱毛,第42天原部分脱毛区有新生毛发长出,第52天新生毛发再次脱落,且脱毛呈进行性发展,小鼠腹部毛全部脱光,背部也有小块脱毛区出现。这一过程类似人类进展性斑秃发病表现。本模型可进行性发展数月。

3 模型指标

3.1表观指标‍

    动物的毛发脱落情况等是模型成功与否的最直接判定指标。

    斑秃模型制备成功后:毛发片状脱落,单发或多发斑秃皮色正常无明显炎症反应斑秃皮肤未见萎缩及瘢痕。

表观指标在斑秃临床诊断中占有重要地位,也是模型是否成功的直接指标,最具特点,权重系数0.5

3.2病理指标  ‍

    局部皮肤病理观察的真皮浅层新生毛囊数、成熟毛囊数、真皮浅层毛细血管数等是模型成功与否的重要判定指标。

斑秃模型制备成功后,取斑秃区的皮肤组织约1cm2,固定、切皮、HE染色、镜检可见:真皮浅层新生毛囊数、成熟毛囊数目减少毛囊萎缩真皮浅层毛细血管数减少。

局部皮肤病理指标是斑秃模型成功与否的直接依据,权重系数0.4

3.3生化指标‍

斑秃模型制备成功后,CD4+TCD8+T细胞的浸润数目增多IFN-γ肿瘤坏死因子(TNF-α)等含量升高。

生化指标是部分斑秃模型(如咪喹莫特乳膏法造模)的重要指标,但特征性不强,是间接相关指标,权重系数0.1

4 备注‍

本制备规范介绍的是与斑秃中西医临床病症特点吻合度较高且应用较多的动物模型。其他模型如将自发斑秃C3H/HeJ小鼠皮损部位移植到正常小鼠,也可诱导产生斑秃,但此方法依赖于自发斑秃的小鼠,大规模应用受限,且技术要求高等。未纳入本规范制备草案。


参考文献:(略)


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